Expresión de antígenos de fiebre aftosa en amplicones virales basados en el virus X de la papa.
Abstract
El presente trabajo de Tesis propone el desarrollo de vectores para la expresión de antígenos de aftosa
en amplicones virales utilizando sistemas no integrativos. El objetivo general es establecer sistemas de
expresión eficientes que puedan luego ser utilizados para la producción de plantas transgénicas que expresen
virus quiméricos. El sistema de expresión no integrativo se basa en la utilización de una copia completa
del genoma del virus PVX cuya expresión se encuentra dirigida por el promotor 35S de CaMV. Se construyeron
amplicones recombinantes que permiten expresar los diferentes antígenos de aftosa (A, VP1 y P1)
como proteína de fusión a la cápside viral produciendo viriones quiméricos. La capacidad replicativa de
dichos amplicones se evaluó por agroinfiltración de plantas de tabaco. La expresión de la cápside viral
fusionada a los antígenos se analizó por Western blot con anticuerpos anti-cápside y anti-epitope A de
aftosa. La estabilidad genética de los amplicones virales se evaluó a través de sucesivas infecciones de
plantas de tabaco con los viriones quiméricos analizando la capacidad de retención de la secuencia insertada
en el genoma viral. Los resultados obtenidos permitieron determinar que el tamaño máximo de la secuencia
que puede ser expresada como fusión a la cápside viral es de 800pb. Los amplicones recombinantes que
contienen los antígenos A y VP1 como fusión a la cápside viral fueron capaces de replicarse y de producir
viriones quiméricos estables, no así el amplicón conteniendo el antígeno P1 que sufrió recombinación perdiendo
la secuencia insertada.